山东正规EdU细胞增殖检测试剂盒购买

EdU标记(a)将细胞完全培养基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU标记培养基；(b)提前将2xEdU标记培养基预热，然后等体积加入到细胞原有培养基中，获得lxEdU溶液，其中EdU的终浓度为10uM；注：1)我们不建议替换全部培养基，因为这样可能会影响细胞增殖的速度；2)配置好的培养基建议现用现配，用量以没过细胞为宜；(c)每孔加入300ul含EdU培养基孵育细胞2小时，弃培养基；注：1)培养时间取决于细胞的增殖速度和生长状态；2)大多数**细胞以及粘附细胞系均可采用2小时的孵育时间(d)以lxPBS清洗细胞两次，毎次5分钟，以除去未掺入DNA的EdU残留EdU细胞增殖检测试剂盒哪家好？上海东寰告诉您！山东正规EdU细胞增殖检测试剂盒购买

    避免反复冻融。如短时间内需多次重复使用，请于4℃避光保存，有效期半年。使用前须知该试剂是采用成像检测方法对贴壁细胞进行检测，适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜等仪器。非贴壁细胞可在孵育EU后进行细胞涂片处理，固定后再采用贴壁细胞的染色流程进行检测。实验准备1、盖玻片2、1×PBS（）（用DEPC水配置）3、含TritonX-100的PBS（用DEPC水配置）4、甘氨酸溶液(2mg/ml)（用DEPC水配置）5、培养板或培养皿实验参考96孔板48孔板24孔板12孔板6孔板EU培养基100μl200μl300μl500μl1ml染色反应液100μl200μl300μl500μl1ml实验步骤(以96孔板，HK2贴壁细胞为例)细胞培养取对数生长期细胞，以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中，培养至正常状态。EU标记1、将细胞完全培养基中按照500：1的比例加入EU溶液，制成2×EU标记培养基；2、提前将2×EU标记培养基预热，然后等体积加入到细胞原有培养基中，获得1×EU溶液，其中EU的终浓度为500μM；注：1）我们不建议替换全部培养基，因为这样可能会影响细胞增殖的速度；2）配置好的培养基建议现用现配，用量以没过细胞为宜；3、每孔加入300μl含EU培养基孵育细胞2小时，弃培养基。湖南如何使用EdU细胞增殖检测试剂盒原理EdU细胞增殖检测试剂盒怎样使用？上海东寰告诉您。

    具有保密性的材料除外）。2、目的蛋白相应一抗：请您提供质量保证的一抗（或委托我公司准备）。抗体的使用量通过预实验后进行确认，原则上不回收使用一抗。3、阳性对照样品（尽量提供）。4、相关文献（可选）。注：若要检测磷酸化蛋白，请在2-3个月内进行，因为长时间保存的样品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而检测不到磷酸化条带。五、提交给客户结果1、预实验显色结果（TIFF格式、JPEG格式或PNG格式），预实验采取3个一抗稀释度，选取部分实验样本。2、正式实验显色结果（TIFF格式、JPEG格式或PNG格式）。3、完整实验报告。六、服务项目说明1、提供的蛋白量与待检测的目的蛋白数量有关，蛋白数量增加相应的样品量也要增加。2、每张膜样品数量为1-8个，不足8个以8个收取。9-16个样品为2张膜，17-24个样品为3张膜；以此类推。举例：7个样品，1个目的蛋白，算1张膜；有9个样品，1个目的蛋白，算2张膜；7个样品，2个目的蛋白，算2张膜，有9个样品，2个目的蛋白，算4张膜。注：以上为一般算法。如果客户样品数量需要按照组别等来进行上样时，需要重新确定每张膜的上样量及膜的张数。3、选择部分样品进行预实验，参考目的蛋白一抗说明书进行3个稀释度的预实验。

通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤，在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。EdU法检测试剂盒是Brdu方法的**性突破。EdU（5-溴-2-脱氧尿嘧啶）试剂盒是一种嘧啶类似物，可以在DNA合成期整合入DNA双链。通过以上原理图的对比，大家不难发现，EdU法检测细胞增殖，无须抗体，无变性步骤，保持细胞形态和DNA完整性，是一种简单，可靠，省事的创新方法上海哪家EdU细胞增殖检测试剂盒厂家值得信赖？

传统的免疫荧光染色（BrdU）检测方法需要DNA变性，抗原修复，抗原抗体过夜孵育，操作步骤复杂繁琐。并且由于BrdU抗体分子较大，嵌入DNA分子中的BrdU无法直接与BrdU抗体结合，必须先进行DNA变性操作才能使BrdU抗原表位暴露，但变性的程度可能导致错误结果。如果变性不充分，会导致BrdU难以暴露，无法检测，而且变性过程从边缘向中间渗透，会导致细胞核DNA的变性不均匀，边缘模糊不清。如果变性过分，则会导致DNA断裂，甚至降解，导致核染不均一。另外，不同抗体试剂公司的抗体质量不一致，造成难以确保实验重复性，且容易产生假阳性结果。EdU细胞增殖检测试剂盒的作用是什么？上海东寰告诉您。如何使用EdU细胞增殖检测试剂盒购买

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另一方面，EdU上的乙炔基能与生物素标记的叠氮化物(Biotinlabeledazide)通过一价铜离子的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，该反应非常迅速，被称作点击反应(Clickreaction)，其反应原理参见图1。通过点击反应，新合成的DNA会被相应的生物素探针所标记，从而可以使用适当的检测设备检测到增殖的细胞。图1.BeyoClick™EdU检测法中的点击反应(Clickreaction)原理图。生物素或荧光探针等标记的叠氮化物(LabeledAzide)与掺入到细胞DNA中的EdU，在铜离子的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，终使细胞DNA标记上生物素等探针。本试剂盒反应简单、检测灵敏度高。本试剂盒基于简单高效的点击反应，无需DNA变性，只需少量的小分子叠氮化物探针即可非常有效地标记出掺入的EdU，并且可以检测到单个细胞的增殖情况。山东正规EdU细胞增殖检测试剂盒购买